p53是重要的肿瘤抑制蛋白，可参与细胞第一个间期（G1）的抑制，促进细胞凋亡和DNA修复。HPVE6蛋白与野生型p53具有高度的亲和性，二者结合可使p53快速降解，由此可阻碍细胞对DNA损伤的反应，导致遗传性状改变的累积，进而产生基因型恶变。
HPVE7蛋白可干扰细胞周期，使细胞持续分化和发生癌前病变，导致细胞调控失控，发生永生化，若未经治疗，则进展为癌症。E7蛋白可优先与pRb结合，削弱pRb功能，扰乱转录因子E2F结合的能力，开始致癌转化过程，导致上皮细胞的生长失调控，引起包括Ki-67、p16蛋白在内的原本正常的细胞增殖蛋白出现异常表达。
p16基因是细胞周期素依赖性激酶（CDK）抑制剂的典型代表，与多种肿瘤有关，称为多肿瘤抑制基因，其基因产物对CDK4的活性有抑制作用，因而也称为p16INK4。p16过度表达提示正常细胞处于细胞周期的阻滞期，短时间的HPV感染不会影响细胞周期的调控，而持续性HPV感染的细胞的异常增生，导致p16过表达，因此p16过表达可作为宫颈病变的标志物。而Ki-67是一种标志着细胞周期进展及增殖期细胞的核抗原基因，其表达仅限于细胞增殖周期的G1、S、G2期和M期，且在G0期表达缺失。Ki-67过度表达提示细胞处于细胞周期的增殖期。
通常生理机能正常的细胞，p16和Ki-67的表达会相互拮抗，不会同时出现。如果，p16和Ki-67同时过度表达，则提示pRb蛋白失活，细胞周期调控失调。因此，在同一细胞中同时检测p16和Ki-67可作为细胞周期失调的标志物，其与高危型HPV病毒诱导的致癌性转化相关，能够帮助检出真正的病变细胞，且不依赖于形态学检查结果。当p16/Ki-67检测阳性时，可强烈提示高级别病变，为区分潜在高级别病变妇女提供了客观的检测指标。
美国病理学家协会（CAP）和美国阴道镜和宫颈病理学会（ASCCP）指南指出，p16可作为反映HPVE6/E7影响细胞增殖的标志物，有足够证据表明能够用于低级别肛门-生殖道鳞状上皮病变相关推荐，建议使用特定克隆号（E6H4）的p16INK4a抗体作为检测HPV感染是否影响到细胞周期调控的生物标志物。该克隆号是全球唯一获得IVD认证的p16INK4a抗体。
CINtecPLUS（p16/Ki-67细胞学双染检测）改善宫颈癌筛查分流管理
目前，我国宫颈癌筛查面临着细胞学检测敏感度较低（50-70%）、观察者间重复性差、质量控制不足、技术人员缺乏等问题，生物标志物p16/Ki-67的应用可以有效改善细胞学分流检测。高灵敏度和特异性的CINtecPLUS检测可应用于：对无明确意义的非典型鳞状上皮细胞（ASC-US）的分流（特别是针对年轻女性）；低度鳞状上皮内病变（LSIL）分流；细胞学与HPV联合筛查时，对细胞学阴性但高危型HPV阳性者进行分流；以及HPV作为初筛时，对高危型HPV阳性者进行分流检测。CINtecPLUS技术可有效降低高级别宫颈病变的漏诊率，为临床和患者诊疗提供充分的时间与依据，改善前期宫颈疾病检测和早期干预。同时，也可以减少和避免不必要的阴道镜检查。
一项多国家、多中心的前瞻性研究PALMS（PrimaryASCUSLSILMarkerStudy）对超过27,000名、平均年龄39.9岁的妇女进行筛查。试验期间对所有妇女进行传统的细胞学（巴氏涂片）、p16/Ki-67双染（CINtecPLUS）及HC2HPV检测，并以活检确认CIN2+为检测终点。研究证实，相比传统细胞学，CINtecPLUS检测在不影响特异性的前提下，对CIN2+的敏感性提高18%（86.7%vs68.5%）。对于HPV阳性妇女的分流，相比传统细胞学，CINtecPLUS双染检测对CIN3的敏感性提高17%（88%vs71%）。在575例细胞学检测为ASC-US的患者中，18例患者经活检证实为CIN2以上，CINtecPLUS双染的灵敏度为94%，特异性为78%，且高于HC2HPV检测。同时，526例LSIL患者中，有63例经活检证实为CIN2以上，此时CINtecPLUS检测特异性为54%，远高于HC2HPV检测。
此外，EEMAPS（EuropeanEquivocalorMildlyAbnormalPapanicolaouCytology）回顾性研究对5个欧洲细胞学实验室总计776例ASC-US/LSIL液基细胞学（ThinPrep）剩余标本，进行了细胞学采样后6个月内活检、p16/Ki-67双染（CINtecPlus）及HC2HPV检测。其中，在361例ASC-US患者中，有77例证实为CIN2以上；在425例LSIL患者中，有72例证实为CIN3以上，CINtecPLUS检测针对CIN3+以上检测的灵敏度达到96%，而特异性为68%，高出HC2HPV检测49%，说明双染检测可作为更合理的LSIL分流手段。
当采用细胞学与HPV联合筛查时，CINtecPLUS双染检测可应用于对细胞学阴性但高危型HPV阳性者进行分流检测。一项入组425例30岁以上、细胞学阴性、高危HPV检测阳性妇女的试验结果显示，CINtecPLUS双染检测针对CIN2+的灵敏度达到91.9%，而特异性为82.1%，针对CIN3+的灵敏度达到96.4%，而特异性为76.9%。
（实习编辑：许晓静）
